groen fluorescerend eiwit (gfp) is een soort bioluminescerend eiwit, gevonden in co-entereren. gfp is gemakkelijk te detecteren, hoge gevoeligheid, stabiele fluorescentie-eigenschappen, sterke tolerantie, gemakkelijk uit te drukken, zonder cytotoxiciteit, gebruikt voor levende cel detectie. daarom kan gfp worden gebruikt als een reportergen voor het detecteren van genexpressie of regulatie, of als een fusielabel voor het detecteren van de lokalisatie, migratie, conformatie-verandering en intermoleculaire interactie van eiwitmolecuul, of gerichte marker voor sommige organellen. de maximale piek van het gfp-absorptiespectrum is 395 nm (uv) en met een 470 nm adjunct absorptiepiek (blauwe straal). de maximale piek van het emissiespectrum is 509 nm (groene straal) en met een zijpiek van 540 nm (shouder). 450nm-490nm is alleen de adjunct absorptiepiek van gfp, maar omdat het excitatielicht minder schade aan cellen toebrengt, wordt de band meestal vaker gebruikt (voornamelijk 488nm). bovendien zijn de spectrumeigenschappen van gfp vergelijkbaar met fluoresceïne isothiocyanaat (fitc), beide hebben meestal een set filters. gfp-fluorescentie is extreem stabiel. onder het excitatielicht is het vermogen van gfp-fotobleken sterker dan fluoresceïne. in het bijzonder is het stabieler bij de de blue ray-golf van 450 nm-490 nm. evenzo is de gevoeligheid van de fluorescentie van gfp-fusie-eiwit hoger dan het fluorescerende antilichaam van fluorochroom-labeling, is sterk anti-licht blekend vermogen, dat meer geschikt is voor kwantitatieve bepaling en analyse. het genereren van gfp-fluorescentie hoeft niet te worden onderworpen aan een exogeen reactiesubstraat. daarom is gfp als een breed toegepast levend rapporteureiwit, het effect ervan is niet geëvenaard door enig ander enzymrepresentant-eiwit. GFP is echter geen enzym. het fluorescentiesignaal heeft geen enzymatisch amplificatie-effect. dus, de gevoeligheid van gfp is mogelijk lager dan die van andere enzymrepresentereiwitten, zoals vuurvliegluciferase.

de manieren om GFP te observeren:

1.portable gfp excitatie lichtbron

het gebruik van draagbare gfp-excitatie-lichtbron is de handigste en snelste observatiemethode (fluorescente proteïne-observatiespiegel genoemd). omdat gfp een hogere absorptiepiek heeft op 470 nm, kan het gebruiken van 470 nm excitatielichtbron gfp stimuleren om heldergroene fluorescentie uit te zenden. we moeten professioneel observatieglas dragen om het heldere fluorescentiesignaal te observeren wanneer we observeren gfp-fluorescentie . de reden is excitatie licht is intens blauw licht.

2.uv lichtbron

met behulp van uv-lichtbron (genaamd uv-lamp , black light lamp) observatie is ook erg handig. maar als u de plant observeert, fluoresceert ook bladerig groen van het gebladerte van planten onder ultraviolet licht. het gaat interfereren gfp-fluorescentie . bovendien kunnen de monsters ook schade toebrengen aan de gfp-monsters onder uv-licht.

3. fluorescentiemicroscoop

fluorescentiemicroscoop is gebaseerd op uv als lichtbron, wordt gebruikt om het gedetecteerde object te bestralen, laat het fluoresceren en observeert vervolgens de vorm en locatie van het object onder een microscoop. fluorescentiemicroscoop wordt gebruikt om de absorptie van intracellulaire stoffen, transport, de distributie en de locatie van chemische stoffen te onderzoeken. sommige stoffen in de cel, zoals bladgroen, kunnen fluoresceren na bestraling met ultraviolet licht. andere stoffen, fluoresceren niet zelf, maar als u het verft met een fluorescerende kleurstof of een fluorescerend antilichaam, kan het ook fluoresceren door ultraviolet licht. fluorescentiemicroscoop is een van de instrumenten voor kwalitatief en kwantitatief onderzoek naar dergelijke stoffen. op dit moment is de populaire methode het gebruik van fluorescentiemicroscoopobservatie. fluorescentiemicroscoop is erg populair in het laboratorium. maar de enige tekortkoming is dat de plakjes van het blad of dier moeten worden verzameld voor observatie, die de gekweekte specimens zullen vernietigen en geen viviperceptie kunnen waarnemen.

Uitgebreide analyse, het is de snelste en handigste methode om gfp te observeren door draagbare gfp-excitatie-lichtbron aan te nemen (transgene bios-cope genaamd).